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      PCR實驗室為什么要三區隔離
      分類:熱點專題 作者:acmelab 發布時間:2023-10-27 11:34:58

      為保證PCR實驗結果的準確及可靠性,專業的PCR實驗(比如臨床PCR檢驗實驗室)室有四區隔離(或至少是三區隔離)的要求,常見的三區指的是:

      1、試劑配制區:PCR反應體系的配制區域。
             2、標本處理區:包括擴增模板的制備,也就是我們常常提取DNA的地方;
             3、PCR擴增和產物分析區:進行PCR擴增的區域,也是擴增產物進行凝膠電泳分析的區域。
             

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      此外,如果將PCR擴增區域和產物分析區再次分開,就是四區隔離了。

      四區隔離,主要目的是防止氣溶膠在各個PCR區域之間的流動—最好的方法是干脆每個區域隔一幢樓,那肯定是最佳的隔離措施了,但操作起來肯定不現實,于是便有了針對不同區域設置正負壓的方法:

             試劑配制區(Ⅰ區):最潔凈的區域,保持微正壓使得外界空氣無法進入隔離污染源。并且陰性模板應該在此區加入PCR管并蓋蓋,嚴禁在此區域打開、存放裝有DNA模板的離心管;

             DNA模板添加區(Ⅱ區):保持微負壓,保證內部空氣不外泄,以免陽性模板的氣溶膠對外界環境造成污染。

             擴增及PCR產物分析區(Ⅲ區):保持微負壓,使得內部空氣不外泄,以免擴增產物的氣溶膠對外界環境造成污染。操作時遵循Ⅰ區→Ⅱ區→Ⅲ區單一方向進行,不可逆向進行。

      對于科研用途的PCR實驗室,如果無法達到嚴格的三區隔離的要求,至少也要做到兩區隔離:即正壓區和負壓區。正壓區實施Ⅰ區的功能,負壓區實施Ⅱ區,Ⅲ區的功能。

            最忌諱也是最可怕的是反過來,在正壓區實施Ⅲ區的功能。PCR實驗室不同區域間的空氣是-互相之間有流通是關鍵所在。

            如果有問,我們的實驗室沒有正負壓的區分,或者是全負壓,全正壓怎么辦呢?那我們的建議是:別怕麻煩,找個遠離Ⅲ區(通俗地講就是打開PCR擴增產物的蓋子區域,比如電泳區)的實驗室當做PCR I區使用,能省掉后續更多的麻煩。

           既然PCR三區隔離的目的是為了阻斷氣溶膠的交流,請注意以下細節,思考一下氣溶膠來自哪里:
           1. 每個區域都應配備專用的移液器,不可交叉混用。
           2. 每個區域都應配備專用的移液器吸頭,不可交叉混用。
           3. 如果條件允許,在PCRⅢ區工作結束后再次進入PCR I區需要更換實驗服、一次性鞋套、帽子、手套。
           4. 在PCR I區、PCRⅡ區配備帶濾芯吸頭。

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